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2023-07-1822814 次瀏覽
使用指南 | 多層細胞培養瓶培養貼壁細胞

貼壁細胞的應用

貼壁細胞培養是生命科學領域中常見的實驗技術之一,它可以應用于多種場景,包括但不僅限于:

1.藥物篩選:通過培養貼壁細胞,可以測試藥物的療效和毒性,從而篩選出具有治療潛力的藥物。

2.細胞學研究:貼壁細胞培養可以為細胞學研究提供許多有用的信息,例如細胞分裂、分化和轉化等

3.疾病模型:通過培養患者的貼壁細胞,可以建立與某些疾病相關的細胞模型,例如癌癥。

4.基因編輯:貼壁細胞培養可以為基因編輯提供重要的支持,例如CRISPR-Cas9基因編輯技術。

總之,貼壁細胞培養一項非常重要的生命科學技術,可以應用于許多不同的場景和研究領域。


使用指南



接種細胞懸液

1.細胞懸液混勻:按照實驗要求的濃度準備細胞,在培養基瓶、培養瓶或其他容器中混勻。建議的工作容積為每層30-50 mL.

2.用移液管緊貼瓶壁緩慢地將液體加到五層細胞培養瓶中,避免產生泡沫或者氣泡(每次加液時移液管內液體可留少許)。

注意事項: 10 ml移液管可以伸到培養瓶底部使培養基分散開,而25 mL移液管則只能伸到NEST標志的地方把液體分散開。

3.把培養瓶有NEST標志那一側朝向自己,順時針做斜45度左右放置一段時間,使瓶中各個隔層的液體達到平街。

4.輕緩地將培養瓶水平放置于工作臺上,有NEST標志那一面朝上。

5.前后左右輕輕晃動多層瓶,液體會均勻地分布在五個生長面上。

注意事項:搖晃的動作要輕柔,一方面是防止起泡沫,另一方面是要防止培養基港漏到下層中。

移除培養液

 抽吸法 

抽吸的時候,將多層瓶做斜45度,有NEST標志的一面朝向自己。

將移液管伸到底部抽吸培養基,直至完全抽吸完。

 傾倒法 

將有NEST標志的一面朝向自己,逆時針45度傾倒液體。

注意事項: 抽吸培養液時建議使用10 mL移液管,才能將培養液吸盡。

收集細胞

1.用緩沖液清洗一遍以去除殘留的血清,后加入消化液 (> 5 mL層),混勻。

2.消化大約2 min (視細胞情況而定) ,用消化終止液中和消化液

3.采用移液管抽吸法或做倒法將細胞懸液置于離心管等容器中。

4.用一定量的緩沖液沖洗多層瓶三次,將沖洗液分別置于離心管中,混勻計數或者傳代接種。


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